De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Studies naar de rol van de nieuwe hersenspecifieke V-ATPase subunit Ac45RP in neurale uitgroei

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Studies naar de rol van de nieuwe hersenspecifieke V-ATPase subunit Ac45RP in neurale uitgroei

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Recent werd het nieuwe hersen-specifieke eiwit genaamd Ac45-gerelateerde proteïne (Ac45RP) ontdekt. Van dit eiwit wordt verwacht dat het bindt aan de membraansector (V0) van de V-ATPase. De V-ATPase is een protonenpomp en bestaat behalve uit de membraan-gebonden V0-sector ook uit de cytoplasmatische V1-sector. De V0-sector speelt een belangrijke rol bij membraanfusie. Het Ac45RP werd aangetoond in blaasjes (enlargeosomen) welke membraan leveren aan de groeikegel van de uitgroeiende neuriet in primaire corticale neuronen. Overexpressie van Ac45RP in neuroblastoma 2a (N2a) cellen leidde tot een verhoging van neurale uitgroei. Het Ac45RP/V0 complex zou kunnen functioneren bij de membraanfusie van enlargeosomen met het plasmamembraan in de groeikegel. Het doel van dit onderzoek was om meer inzicht te krijgen in de eigenschappen, functie en lokalisering van Ac45RP. Om dit doel te kunnen bereiken, werden verschillende studies uitgevoerd. N2a cellen werden behandeld met tunicamycine om de glycosylering van het Ac45RP-eiwit te remmen. Daarnaast werd de endogene Ac45RP mRNA expressie bepaald in N2a cellen na differentiatie van de cellen. Verder werd er een reductie van het endogene Ac45RP mRNA/eiwit verkregen door middel van RNA interferentie (short hairpin RNA’s (shRNA’s)) en werd de invloed op neurale uitgroei bestudeerd. Ook werden er Dendra2 gefuseerde Ac45RP-eiwitten in N2a cellen gebracht om door middel van live cell imaging het proces van neurale uitgroei te kunnen gaan volgen. Naast deze studies werd door middel van in situ hybridisaties bestudeerd in welke cellen van het muizenbrein Ac45RP tot expressie komt. Uit de resultaten van dit onderzoek kan geconcludeerd worden dat Ac45RP mogelijk uit twee geglycosyleerde vormen bestaat en dat er na differentiatie geen extra nieuw Ac45RP mRNA gevormd wordt. Verlaging van Ac45RP mRNA expressie via transiënte transfecties met shRNAs lijkt het proces van neurale uitgroei niet duidelijk te remmen. De nieuw-gegenereerde stabiele shRNA cellijnen toonden een duidelijke reductie van Ac45RP mRNA expressie aan en deze lijnen kunnen worden gebruikt voor verder eiwit en differentiatie-onderzoek. De expressie van de Dendra2 fusie-eiwitten bleek te laag voor live cell imaging en moet dus nog verder geoptimaliseerd worden. Verder bleek het gevolgde in situ hybridisatie protocol goed te werken voor de detectie van Ac45 mRNA maar zal nog verder moeten worden geoptimaliseerd voor Ac45RP mRNA detectie. Deze studie heeft dus een aantal nieuwe tools opgeleverd om de functie van het Ac45RP glyco-eiwit in het proces van neuronale uitgroei verder te kunnen bestuderen.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
OpleidingBiologie en Medisch Laboratoriumonderzoek-Breda
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersNijmegen Centre for Molecular Life Sciences (NCMLS)
Datum2012-01-03
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk