De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Opzetten en optimaliseren moleculaire diagnostiek thalassemieën

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Opzetten en optimaliseren moleculaire diagnostiek thalassemieën

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Tot op heden wordt de moleculaire diagnostiek van α-thalassemieën uitgevoerd door afzonderlijke PCR’s in te zetten. Deze methode kost relatief veel tijd en materialen. Een efficiëntere methode voor deze assay is een multiplex-PCR. Een mutiplex-PCR is opgezet volgens het artikel Arnold S. -C. Tan et al. (2001) [1] en geoptimaliseerd. Om de werkwijze te optimaliseren is getest met het combineren van controles en het maken van een primerstock-oplossing. Het combineren van controles heeft als voordeel dat dit minder pipetteerwerk is en minder materiaal kost. De primerstock-oplossing heeft als voordeel dat de verschillende primers in één oplossing worden bewaard en deze kan worden gebruikt in de wekelijkse assay. Een andere mogelijkheid die ook is getest, is de primerstock-oplossing te verdelen over epjes waarbij één epje gebruikt kan worden voor een reactiemix en dit wordt dan maar eenmalig ingevroren en ontdooit. Het voordeel van een primerstock-oplossing is het reduceren van pipetteerwerk bij het inzetten van de analyses. Er wordt ook met minder kleine volumina gewerkt waardoor er minder variatie tussen de analyses zal zijn.
Naast de multiplex-PCR voor α-thalassemieën is de α-Globin StripAssay van ViennaLab getest. Deze strip assay zou een alternatief kunnen zijn voor de multiplex-PCR of voor aanvullend onderzoek kunnen worden gebruikt. Het resultaat laat zien dat de voorkeur naar de multiplex-PCR gaat. De strip assay kan als aanvullend onderzoek worden gebruikt als er geen afwijking wordt gedetecteerd in de multiplex-PCR. Echter bestaat de kans dat er mutaties zijn die de strip assay ook niet detecteert. De strip assay detecteert namelijk 21 van de 83 veel voorkomende α-globine mutaties, zie tabel 1. Het opsturen naar een ander laboratorium voor uitgebreid onderzoek blijft daarom een optie.
Naast het optimaliseren van de diagnostiek voor α-thalassemieën is ook een assay voor β-thalassemieën opgezet. Hierbij is gebruik gemaakt van de β-Globin StripAssay. Deze strip assay kent drie varianten namelijk: MED (voor het Mediterrane gebied), IME (voor India en het Midden-Oosten) en SEA (voor Zuid-Oost Azië). In West-Europa komen van origine nauwelijks thalassemieën voor. Er is geen kit gemaakt die zich richt op het deel van Europa waar Nederland toe behoort. Er zijn enkele onderzoeken gedaan [11,12] waarbij samples van patiënten met een β-thalassemie uit Nederland zijn geanalyseerd. Procentueel gezien detecteert de IME kit de meeste mutaties die gevonden zijn bij deze twee onderzoeken.
Er zijn 29 samples met een mogelijke β-thalassemie geanalyseerd waarbij in 27 samples één of meer mutaties zijn gevonden. 26 van de 27 zijn met de MED kit gedetecteerd. Één sample werd niet gedetecteerd met de MED kit maar wel met de IME kit. Tevens is er één sample die met de MED kit is gedetecteerd maar niet zou worden gedetecteerd met de IME kit. In deze onderzoeksgroep ondervangen zowel de MED als de IME kit evenveel mutaties.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
OpleidingBiologie en Medisch Laboratoriumonderzoek-Breda
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersSt. Elisabeth Ziekenhuis, KCHL
Datum2012-11-01
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk