De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Het determineren van de Chlamydia trachomatis L-serotypen

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Het determineren van de Chlamydia trachomatis L-serotypen

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Urogenitale Chlamydia trachomatis veroorzaakt wereldwijd een van de meest voorkomende SOAs. Chlamydia
trachomatis bestaat uit verschillende serotypen, die verschillende aandoeningen kunnen veroorzaken. De
serotypen A-C veroorzaken trachoom, een chronische ziekte aan het oog; de serotypen D-K veroorzaken
urogenitale infecties en de serotypen L1, L2 en L3 veroorzaken lymphogranuloma venereum (LGV). LGV is een geslachtsziekte die voornamelijk uit tropische en subtropische gebieden geïmporteerd wordt. In 2003 is er in Rotterdam een kleine LGV epidemie ontstaan onder, overwegend HIV positieve, mannen die seks hebben met mannen (MSM).

Tijdens deze afstudeerstage lag de focus op de Chlamydia trachomatis L-serotypen. Voor de detectie van de Lserotypen heeft PAMM namelijk geen determinatie protocol, waardoor determinatie uitbesteed wordt. Door het opkomend aantal patiëntenmaterialen dat op LGV getest moet worden, wil PAMM zelf over een real-time PCR voor LGV detectie beschikken.
Het doel van deze afstudeerstage was het opzetten van een real-time PCR voor de determinatie van de
Chlamydia trachomatis L-serotypen. Wanneer de test voldoet aan de kwaliteitseisen van de PAMM, zal de LGV real-time PCR gebruikt worden in de routine diagnostiek.

Om het doel te bereiken zijn als eerste primers en probes specifiek voor Chlamydia trachomatis L-serotypen
geselecteerd en geoptimaliseerd. Hierbij is een primer-probe matrix opgezet met primer concentraties
uiteenlopend van 50 nM t/m 900 nM en probe concentraties van 50 nM t/m 600 nM. Daarna is een duplex
real-time PCR opgezet met targets voor LGV en PhHv (remmingscontrole). Vervolgens is een PCR validatie
uitgevoerd, bestaande uit 4 onderdelen: 1) sensitiviteit bepalen m.b.v. een verdunningsreeks van positief LGV
DNA; 2) specificiteit bepalen d.m.v. een specificiteitspanel; 3) reproduceerbaarheid bepalen d.m.v. LGV positief DNA gedurende 7 dagen in drievoud te onderzoeken; 4) klinische evaluatie, door 106 patiëntenmaterialen te onderzoeken op de aanwezigheid van LGV.

Uit de resultaten is gebleken dat de meest optimale primer-probe concentraties 300:300:200 nM (FW:RV:P)
zijn. De analytische sensitiviteit van de LGV PCR is vastgesteld tussen 0.1 en 0.01 IFU. Tevens geven de
resultaten weer dat de LGV real-time PCR specifiek en reproduceerbaar is. Tijdens de klinische evaluatie zijn 8 patiëntenmaterialen, afkomstig van mannen, positief op LGV getest.
Patiëntenmaterialen worden op LGV onderzocht, wanneer deze met behulp van de kPCR positief getest zijn
voor Chlamydia trachomatis. Uit de resultaten is gebleken dat LGV alleen gedetecteerd wordt wanneer
resultaat van de kPCR een Ct waarde van 29 of zwakker bevat.

Er kan geconcludeerd worden dat een real-time PCR voor de determinatie van de Chlamydia trachomatis Lserotypen is opgezet.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
OpleidingBiologie en Medisch Laboratoriumonderzoek-Breda
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersStichting PAMM Veldhoven
Datum2013-06-22
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk