De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Unravelling the genetic and pathophysiological complexity of the mitochondrial myopathies

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Unravelling the genetic and pathophysiological complexity of the mitochondrial myopathies

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Mitochondriën zijn de energiefabrieken van de cel, door middel van vijf complexen wordt er energie opgewekt. Deze vijf complexen worden gecodeerd door mitochondriale en nucleaire genen. Wanneer er een mutatie optreedt in een van deze genen kan een van de complexen of bijbehorende eiwitten non-functioneel worden. Dit leidt tot een gebrek aan het vermogen om energie op te wekken voor de cel. Vooral organen welke een hoog energie verbruik hebben, worden ernstig getroffen door een gebrek aan energie. Deze mutaties kunnen de oorzaak zijn van een mitochondriale myopathie, een groep ziekten waarbij de energievoorziening van spieren is aangetast. Een nieuwe benadering om genetische oorzaken te detecteren is tot dusver onoplosbaar. Alle duizenden genetische varianten in het coderende gedeelte van het genoom worden gedetecteerd, vanuit deze duizenden varianten worden de mogelijk pathogene en oorzakelijke mutaties gefilterd. Whole Exome (WE) sequencen is gebaseerd op Next-Generation Sequencing (NGS) technologie. Deze varianten worden gevalideerd en segregatie in de familie wordt getest met behulp van Sanger sequencing. Twee patiënten van de WE families, DNA 08-5759 en 07-2283, zijn onderzocht en gesequenced, de sequence data verkregen van de twee families is gefilterd met behulp van verschillende filterstappen. Er blijft een gereduceerde subset aan mogelijk pathogene varianten over, van ongeveer 60 en 195 varianten voor respectievelijk familie 08-5759 en 07-2283. Door middel van
verscheidene predictie programma's en het linken van het fenotype aan gen functie werd de lijst verder gereduceerd tot er 2-5 varianten
overbleven. De varianten van familie 08-5759 waren fout positief of kon niet worden gelinked aan het fenotype, KRTAP10.6. De varianten, LAMA3, SYNPO2 en ZYX; welke gevalideerd waren en getest op segregatie, in familie 07-2283 waren interessanter, deze konden worden gerelateerd aan het fenotype. Een van deze varianten, SYNPO2, is uiteindelijk functioneel getest. De locatie van het SYNPO2 eiwit in de cel is bepaald. Het eiwit vormt een diffuse kleuring van het cytoplasma en nucleus, niet in de mitochondriën, waardoor een rol in een mitochondriale ziekte minder waarschijnlijk wordt. De SYNPO2 variant was getest in de familie, beide aangedane patiënten waren
homozygoot voor dezelfde mutatie, maar dat geldt zowel voor de KIAA1109, DCHS2 en LAMA3 varianten. Patiënt fibroblasten zijn getransfecteerd met een specifieke myoD (myogene regulator factor) vector, om de fibroblasten te transdifferentiëren naar spiercellen. De SYNPO2 expressie in deze getransfecteerde fibroblasten is gekwantificeerd met behulp van een relatieve kwantificatie, en was, in vergelijking met de controle, skeletspieren, laag. Er wordt geconcludeerd dat de lage expressie niet wordt veroorzaakt door de SYNPO2 variant,doordat de getransfecteerde controle ook een lage expressie bevat. Maar voor er verdere analyses kunnen worden uitgevoerd, moet de transfectie met de myoD vector worden geoptimaliseerd, delage expressie van SYNPO2 is mogelijk te wijten aan het onvolledig differentiëren van de getransfecteerde fibroblasten. Wanneer een optimalisatie van de transfectie is uitgevoerd, de 'myotubes' lang genoeg in kweek kunnen worden gehouden zodat deze differentiëren, zijn verdere aanvullende functionele testen als kleuringen met Immunohistochemische of fluorescerende
antilichamen, elektronen microscopie en Western blotting mogelijk om de gevormde eiwitten te analyseren.

Toon meer
OrganisatieAvans Hogeschool
AfdelingATGM Academie voor de technologie van Gezondheid en Milieu
PartnersUniversity Maastricht; Clinical Genomics Department
Datum2012-06
TypeBachelorscriptie
TaalEngels

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk