De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Het ontwikkelen van een screeningsmethode voor het bepalen van enzym activiteit

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Het ontwikkelen van een screeningsmethode voor het bepalen van enzym activiteit

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Enzymen zijn biokatalysatoren die gebruikt worden bij tal van industriële processen. Ook bij de productie en ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen worden steeds vaker enzymen gebruikt. Enzymen induceren heel selectief bepaalde reacties en daarom worden ze gebruikt voor toxicologische studies van bestaande en nieuw ontwikkelde medicijnen. Bovendien worden met behulp van deze biokatalysatoren ook nieuwe actievere metabolieten gegenereerd. daarom is het nodig nieuwe en betere enzymen te maken. Deze kunnen vervolgens verder ontwikkeld worden tot echte medicijnen. Om deze actieve metabolieten te maken worden daarom ook nieuwe enzymen ontwikkeld met een verbeterde activiteit, selectiviteit en diversiteit. Waarbij naast actieve ook veel niet actieve enzymen geproduceerd worden. Deze mutanten moeten dan gescreen worden op activiteit. Een grote groep enzymen die in het menselijk lichaam betrokken is bij de metabolisme van endogene stoffen is Cytochroom P450. Daarom worden deze enzymen gebruikt in dit onderzoek.

Het doel van dit onderzoek is het ontwikkelen van een nieuwe analytische methode voor het bepalen van P450 enzym mutant activiteit met behulp van LCMS. Deze methode maakt het gebruik van complexe monstervoorbewerkingstechnieken overbodig. Allereerst is er een fluorescentie plate assay ontwikkeld en hiermee gekeken naar de conversie van alkoxyresorufines naar resorufine door cytochroom P450. Hiermee zijn ook de Km en Vmax waarden bepaald.

Vervolgens is dezelfde conversie ook gemeten met een assay met LC-DAD detectie. Daar was duidelijk te zien dat de piek oppervlakte van de substraat pieken afnam tijdens de reactie terwijl de product piek toenam in intensiteit. Daarna zijn de alkoxyresorufines vervangen door andere substraten. Daarvoor is een scheidingsmethode opgezet met LC-MS. Er is een mix van twaalf verschillende substraten gemeten. Met extracted ion chromatogrammen is het mogelijk alle stoffen te meten.

In het vervolg van het onderzoek is het de bedoeling dat de omzetting van geneesmiddelen door Cytochroom P450 moet worden bepaald met het nieuwe op LC-MS detectie gebaseerde systeem. Voordeel van MS detectie is dat naast de vermindering van het substraat het ook mogelijk is om de gevormde metabolieten te identificeren. Uiteindelijk is het dan de bedoeling dat een geïsoleerde P450 mutant gebruikt gaan worden om de omzetting van een bepaald substraat in een mengsel te bepalen. Aan de hand daarvan kan bepaald worden of een bepaalde mutant de gewenste eigenschappen heeft.

Toon meer
OrganisatieHogeschool Utrecht
OpleidingChemie
AfdelingLife Sciences en Chemistry
PartnerVrije Universiteit Amsterdam
Jaar2007
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk