De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Effect van BRCA mutaties op borst tumorgenese en de reacties op behandeling

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Effect van BRCA mutaties op borst tumorgenese en de reacties op behandeling

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

BRCA 1 en BRCA 2 zijn tumorsuppressor genen die een groot aandeel hebben in erfelijke borst- en eierstokkanker. Heterozygote pathogene mutaties in BRCA1 en BRCA2 genen geven een verhoogde kans op het ontwikkelen van borst- en eierstokkanker. Mutaties in één van deze genen verhoogt de kans op borstkanker met 60 tot 85 procent en een verhoogd risico op ontwikkeling van ovariumkanker van 15 tot 40 procent. De BRCA eiwitten spelen in verschillende processen in de cel een rol zoals, DNA reparatie, apoptose en in de celcyclus. BRCA1 speelt daarbij ook nog een rol in ubiquitinatie en transcriptie. Een van de belangrijkste rollen van de BRCA eiwitten is die in de reparatie van DNA schade. Vele onderzoeken hebben uitgewezen dat de BRCA1 en BRCA2 eiwitten een rol spelen in complexen die dubbel strengs breuken repareren. BRCA1 en 2 sturen aan tot het repareren van dubbel strengs breuken en vastgelopen replicatie vorken door middel van homologe recombinatie en waarborgen daarmee het behoud van genomische integriteit.

Dit onderzoek is onderdeel van een project waarin BRCA1 geassocieerde borst tumorgenese wordt onderzocht. BRCA1 is essentieel voor overleving van elke cel. Een centrale vraag in BRCA1 geassocieerde tumorgenese is waarom BRCA1 deficiëntie wordt getolereerd en zelfs geselecteerd gedurende tumorgenese. Dit suggereert dat er extra factoren zijn die ervoor kunnen zorgen dat BRCA1/2 deficiënte tumoren kunnen blijven prolifereren. Een van de doelen van het project is om genen en signaal transductie routes te identificeren die proliferatie van BRCA1 deficiënte tumoren mogelijk maken. Hiervoor worden er functionele genetische screens ontwikkeld in conditionele BRCA1 knockout cellen. Een deel van dit onderzoek richtte zich op het opzetten van functionele genetische screens in BRCA1 ‘mouse embryonic fibroblasts’ (MEF’s).

Voor de genetische screens in BRCA1 deficiënte cellen werden Brca1 selecteerbare conditionele knockout ‘mouse embryonic fibroblasts’ geïsoleerd en geïmmortaliseerd. Met deze cellen zijn vervolgens switching experimenten gedaan om switching te optimaliseren. Aan de hand van een southern is bepaald dat een volledige switching te verkrijgen is door kweken met lage concentratie 4OHT gedurende 2 weken. Selectie condities bleken moeilijk te bepalen en een southern van geselecteerde geswitchte ‘mouse embryonic fibroblasts’ moet nog uitwijzen of selectie goed werkt. De screen moet uiteindelijk uitgevoerd worden door gebruik te maken van bijvoorbeeld een cDNA library. Transfectie en infectie controles suggereren dat het gelukt is om de fibroblasten op efficiënte wijze met een retrovirale cDNA library te transduceren.

Een ander onderdeel van het project is om ziekte veroorzakende BRCA1 mutaties, 185delAG en 5382insC, na te bootsen in muizen om specifieke effecten op mammatumor ontwikkeling en reactie op behandeling te bestuderen. Het doel van deze studie binnen dit project is om de truncatie mutatie 185delAG na te bootsen in embryonale stamcellen. In dit onderzoek is gebruik gemaakt van oligotargeting om de truncatie mutatie 185delAG na te bootsen. Oligotargeting is een techniek waarbij genen worden gemuteerd met enkel strengs DNA oligonuleotides. In deze studie werd de techniek toegepast in embryonale stamcellen waarmee uiteindelijk muismutanten gemaakt zullen worden . Het is in deze studie gelukt om een embryonale stamcelkloon te verkrijgen, maar verdere controle experimenten zijn nog nodig voordat er chimeren gegenereerd kunnen worden.

Toon meer
OrganisatieHogeschool Utrecht
OpleidingBiologie en Medisch Laboratorium Onderzoek
AfdelingLife Sciences en Chemistry
PartnersNederlands Kanker Instituut
Jaar2007
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk