Samenvatting

In dit verslag staat de gen expressie en regulatie in de gnl2 mutant centraal. Er is gekeken met behulp van de DNA microarray techniek welke genen up of down gereguleerd zijn. Hierbij zijn zevenentwintig genen gevonden en verdeeld in vier groepen. De eerste groep zijn genen die te maken hebben met apoptose. De tweede groep zijn genen die een rol spelen tijdens de proliferatie. De derde groep genen hebben betrekking op p53 of p53 zelf. En de laatste groep genen zijn onbekend of hebben geen relatie onderling. Van deze groepen zijn er twintig genen uitgekozen die voldoende expressie hadden en van interesse waren.
Met behulp van PCR en kloneringtechnieken kon er voor vijftien genen een specifieke probe gemaakt worden. Vervolgens zijn er In Situ Hybridisaties (ISH) uitgevoerd om de expressie en het expressiepatroon te bepalen. Hierbij is gekeken naar het expressiepatroon in de hersenen.
Van de genen casp8, bax, foxo5, mmp2 en lyrm1 is de expressie up gereguleerd in de microarray, maar dit is niet bevestigd met ISH.
De genen phlda3, vrk2, cyclin G1, mdm2, igf2, tnnt1, gtpbp1l, r-spondin en fst zijn up gereguleerd in de microarray en bevestigd met ISH.
De genen gnl2, cyp17a en ensdart3545 zijn down gereguleerd in de microarray en bevestigd in de ISH.
De genen p53 en cathepsin B zijn in de microarray up gereguleerd, maar met de ISH gaven deze geen duidelijk resultaat.
Het gen sesn3 is in de microarray up gereguleerd, maar in de ISH lijkt er down regulatie te zijn.

Een andere belangrijke vraag in dit project is of gln2 een Wnt-targetgen is. Dit is onderzocht met de zebravislijnen hsΔtcf:GFP, Walkman en Masterblind. Er zijn ISH uitgevoerd waarbij gekeken is of er een toename of afname van gnl2 expressie was. Aan de hand van de ISH foto’s is geconcludeerd dat gnl2 mogelijk een Wnt-targetgen is, maar dat deze niet direct wordt aangestuurd door Wnt.