Samenvatting

Onderzoek in de systeembiologie richt zich op het ophelderen van de relaties tussen ziekte en omgevingsfactoren, zoals levensstijl, voeding en medicijnen. Biomarkers zijn biologische indicatoren die gebruikt kunnen worden om ziekte, kans op ziekte en effecten van de omgeving te meten en te bestuderen. Metabolieten zijn tussen- of eindproducten van biologische processen en spelen als zodanig een belangrijke rol als biomarkers. In deze studie is de werking en ontwikkeling van de AccQ.Tag methode beschreven, een methode die dient voor de bepaling van primaire en secundaire amino-metabolieten in biologische matrices. De doelstelling van dit onderzoek was het identificeren van zo veel mogelijk “potentiële” markermetabolieten in plasma-, urine- en levermatrix. Een specifieke doelstelling daarbij was de selectie van zevenendertig componenten uit de lijst van de op massa geïdentificeerde metabolieten, waaronder de twintig meest gangbare aminozuren (in proteïnen), voor kwantificering en validatie.
Voor het identificatieonderzoek is gebruik gemaakt van LC-(FT-ICR) hoge resolutie MS, waarmee exacte massa’s zijn bepaald. Tweehonderdvijftien metabolieten zijn qua exacte massa “potentieel” aanwezig bevonden. Van deze metabolieten is een “potentiële” targetlist opgesteld. Validatie is verricht met een LC-MS (ion trap). Van zevenendertig met de AccQ.Tag methode onderzochte metabolieten afkomstig uit plasma is een selectie van tien metabolieten geschikt bevonden voor validatie. Deze selectie van tien metabolieten is via standaard additiemethode en met behulp van een Total-QC Excelsheet kwantitatief bepaald. De AccQ.Tag methode blijkt derhalve niet voor alle metabolieten geschikt te zijn. Veertien van de geselecteerde metabolieten zijn potentieel geschikt bevonden voor validatie en kwantificering. Dertien metabolieten zijn niet geschikt bevonden voor de AccQ.Tag methode zoals die in de beschreven proefopzet is uitgevoerd.