De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk

Terug naar zoekresultatenDeel deze publicatie

Moleculaire detectie van MRSA en het ontwerpen van interne amplificatie controle

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Moleculaire detectie van MRSA en het ontwerpen van interne amplificatie controle

Rechten: Alle rechten voorbehouden

Samenvatting

Stafylokokken zijn Gram positieve bacteriën die als normale flora voorkomen op de huid en slijmvliezen, zoals het perineum en de neus. Zij kunnen echter ook infecties veroorzaken. De soorten S.aureus, S.epidermidis en S.saprophyticus worden het meest bij de mens geïsoleerd. Bij bacteriële infecties worden antibiotica voorgeschreven. Maar na het toedienen van het antibioticum methicilline bij patiënten sinds 1959, is de resistentie van S.aureus en S.epidermidis voor deze antibiotica sterk toegenomen. De resistentie wordt veroorzaakt door het MecA gen. De methicilline resistente S.aureus en S.epidermidis worden ook wel MRSA en MRSE genoemd.
De prevalentie van MRSA is in Nederland erg laag. Dit komt doordat patiënten, bij een verhoogd risico op dragerschap, 3 tot 5 dagen geïsoleerd verpleegd worden als zij in een ziekenhuis moeten worden opgenomen. Dit zorgt voor hoge kosten. Om de nodige isolatie te verkorten, de kosten te verminderen en om te voorkomen dat de infectie zich verspreid, moet MRSA snel gedetecteerd worden. Polymerase ketting reactie (PCR) is een goede manier om MRSA te detecteren. De huidige MecA gen PCR is een conventionele PCR. Hierbij moet na amplificatie het product met behulp van een agarose gel worden aangetoond. In dit onderzoek wordt een nieuwe real-time PCR opgezet met nieuwe primers en probe. Bij een real-time PCR vindt detectie al tijdens de amplificatie plaats. Deze manier is sneller en minder contaminatie gevoelig. Deze real-time PCR wordt op de LightCycler 2.0 uitgevoerd. Het verantwoordelijke MecA gen en een specifiek S.aureus gen worden gedetecteerd, omdat het MecA gen ook bij MRSE stammen kan voorkomen. Met deze nieuwe PCR zijn ongeveer 100 S.aureus stammen getest uit de stammenbank op de aanwezigheid van het MecA gen en het S. aureus gen. Voordat er een PCR wordt ingezet, moet het DNA geïsoleerd worden met de methode van Boom et al. Voor deze PCR wordt ook een interne amplificatie controle gemaakt, om te voorkomen dat er vals negatieve resultaten worden waargenomen. Het maken van een interne amplificatie controle is goed gelukt.
MRSA kan ook aangetoond worden m.b.v. een commerciële real-time PCR test, IDI-MRSA, op de SmartCycler. Hierbij wordt MRSA direct uit patiëntenmateriaal getest. In dit onderzoek is deze PCR gevalideerd voor verschillende klinische materialen en vergeleken met de opgezette real-time PCR.
Detectie van MRSA m.b.v. de SmartCycler assay bleek gevoeliger te zijn dan detectie m.b.v. de “in house” real-time PCR op de LightCycler. De SmartCycler is ook sneller dan de LightCycler, omdat de voorbehandeling van de LightCycler assay langer duurt. De SmartCycler assay was niet geschikt voor detectie van MRSA in sputum, maar wel voor urine. Toch is de SmartCycler assay een goede en snelle methode voor MRSA detectie. Met snelle detectie zullen niet alleen de patiënten tevreden zijn, maar zullen de kosten van ziekenhuisopname ook verminderen.

Toon meer
OrganisatieHogeschool Utrecht
OpleidingBiologie en Medisch Laboratorium Onderzoek
AfdelingLife Sciences en Chemistry
PartnersAcademisch Medisch Centrum
Jaar2006
TypeBachelor
TaalNederlands

Op de HBO Kennisbank vind je publicaties van 26 hogescholen

De grootste kennisbank van het HBO

Inspiratie op jouw vakgebied

Vrij toegankelijk